乙肝表面抗原的
ELISA
法定量分析
方法學驗證
姓名
Z P
學號
0925400072
班級
09
級醫學檢驗本科二班
指導老師
沈
富
兵
二〇一三年四月
乙肝表面抗原定量測定的方法學驗證
作者:
ZP
(成都醫學院檢驗醫學院
09
級醫學檢驗本科二班,
610500
)
【摘要】
目的
用福州藍圖生物工程有限公司出品的乙肝表面抗原
ELISA
法定量分析試劑盒對乙肝表面
抗原定量測定的方法進行驗證,以判斷是否能用于教學以及臨床分析。
方法
運用
ELLISA
法定量測定乙
肝表面抗原,應用試劑盒
HBsAg
標準從濃度為
8ng/ml
的
2
倍稀釋的
6
個濃度梯度,根據
OD
值繪制標準
曲線再計算相對回收率和板內和板間精密度,
通過資料數據綜合分析。
結果
HBsAg
線性較好,
其準確度、
精密度、
LOD
值均在正常范內。
結論
ELISA
法定量檢測
HBsAg
能較準確、快速地反映體內乙肝病毒復
制情況,可以用于教學以及臨床分析。
【關鍵詞】
乙肝表面抗原
方法學驗證
標準曲線
精密度
ELLISA
病毒性肝炎中乙型肝炎的危害較大,我國是病毒性乙型肝炎的高發流行區,
普通人群的乙型肝炎病毒
(hepatitis
B
virus
,
HBV)
感染率接近
60
%,約占世界
HBV
攜帶者的
1/3
。
乙型肝炎病毒的病原體不僅具有傳染性,
還可能導致發展成肝
硬化,甚至肝癌,所以乙型肝炎病毒的早期、準確、定量檢測對乙型肝炎臨床診
斷、療效觀察及預防具有重要的意義。酶免分析法
HBV
—
EIA
是
HBV
抗原和抗體最
常用的檢測技術,其方法簡便、價廉,適合一般實驗室推廣,其中酶聯免疫吸附
技術
(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)
目前應用最為廣泛,它常用
聚苯乙烯為固相載體,
使其與待測標本中的相應抗體或抗原結合,
然后加酶標記
的抗原或抗體,
再加底物顯色,
最后根據色澤深淺來推算待測抗原或抗體的含量。
此方法特異性高,有效測定范圍可達到
20500 ng/ml
,且酶免疫法有標記的試劑
比較穩定并且無放射線危害等優點。
我們采用對已知抗體濃度的樣品進行
ELISA
的定量檢測,通過對其數據的分
析來驗證
ELISA
法最乙肝表面抗原定量檢測的準確性和可靠性,
以衡量其實用性。
1
材料與方法
1.1
材料
1.1.1
試劑盒
乙肝表面抗原
ELISA
法定量分析試劑盒,福州藍圖生物工程有限公司出品。
1.1.2
儀器及酶標板
酶標儀:
Bio-Rad 680
;洗板機:
Bio-Rad 1575
;超純水系統:
Millipore Elix
;
電熱恒溫培養箱
(DNP-9052):
上海精宏實驗設備有限公司。
1.1.3
溶液配制
⑴
0.01M pH7.4
的
PBS
緩沖液:
稱取
8g NaCl
、
0.2g KCl
、
1.44g Na2HPO4
和
0.24g KH2PO4,
溶于
800ml
蒸
餾水中,用
HCl
調節溶液的
pH
值至
7.4
,最后加蒸餾水定容至
1L
即可。
⑵質控品:
用
PBS
緩沖液將標準品配制成
6
、
3
、
1.5ng/ml
三個質控品,每質控品
1ml
。