用兩種方法檢測乙肝表面抗原結果分析
目的
了解用
ELISA
法檢測乙肝表面抗原和用化學發光法檢測表面抗原兩者
之間的結果情況。方法
采集
320
例就診人員的血液標本,分別用化學發光法與
ELISA
法檢測。
結果
320
份標本中,
發光法檢測出
40
份陽性,
280
份陰性。
ELISA
法檢測出
42
份陽性,
278
份陰性。經
χ2
檢驗兩者無顯著性差異(
P>0.05
)
。結論
ELISA
法成本比較低,耗時長,
實驗的影響因素比較多,易出現假陽性?;瘜W發
光法成本高,所需時間短,干擾因素少,不易出現假陽性。
標簽:乙肝表面抗原;
ELISA
;化學發光
流行病學調查結果顯示,
我國的乙型病毒肝炎感染性約達
10%
,
乙肝的實驗
檢測對其防治具有非常重大的意義
[1]
。乙型肝炎病毒乙肝表面抗原(
HBsAg
)
是乙肝病毒的外殼蛋白,它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、淚水、鼻
咽分泌物、
精液及陰道分泌物中。
隨著科學越來越進步,
檢測的手段也越來越多。
自
20
世紀
70
年代至今,
諸多高敏感性的檢測方法被廣泛應用于臨床免疫學的檢
測中,
當中應用最為廣泛的就屬酶聯免疫法
(
enzyme linked Immunosor bent assay
,
ELISA
)
[2]
。
近幾年,
化學發光微粒子免疫分析法
(
chemiluminescent microparticle
immunoassay
,
CMIA
)正逐漸發展,是一種敏感性較強的臨床免疫學檢測方法,
有效解決了低濃度乙型肝炎病毒乙肝表面抗原的檢測難題
[3]
?,F用
ELISA
法,
化學發光法,這兩種方法檢測的相關性進行探討。
1
資料與方法
1.1
一般資料
標本來自于我院
2016
年
3
月
1
日~
3
月
5
日體檢人員,
共
320
例,男
198
例,女
122
例,年齡
18
~
72
歲,平均年齡為(
39.5±
8.4
)歲。
1.2
標本采集
用紅頭采血管,
真空抽取靜脈血
3 ml
,
標本靜置后離心提取血
清。
1.3
檢測試劑與儀器
一種采用雅培化學發光
HBsAg
定量檢測試劑盒,標本
離心后,按照雅培
I2000
化學發光儀的操作規程檢測。試劑源自美國雅培公司,
批準文號為
70318HN00
,儀器為美國雅培公司生產的
i2000r
化學光分析儀。另
一種采用英科新創
HBsAg
酶聯免疫吸附試劑盒,安圖酶標儀,按照說明書的操
作步驟進行。試劑
由
英科新
創
(廈門
)
科技有限
公司提
供,批準文
號為
2008095514
,主要儀器為酶標儀(型號:伯樂
680
)
、恒溫水浴箱(生產企業:
上海博訊公司醫療器械廠)
。
1.4
結果陽性的判讀
化學發光法檢測含量
>0.05
為陽性。
ELISA
法:檢測標
本的
OD
值
/0.105>1
為陽性。
2
結果
320
份標本,
ELISA
法檢測出
278
份陰性,
42
份陽性,
其中
40
份陽性的
OD
值
>0.5
,
2
份標本的
OD
值
<0.5
?;瘜W發光法檢測出
40
份陽性,其中
ELISA
法
檢測的那
2
份
OD
值
<0.5
的陽性標本檢測為陰性。最后再用
ELISA
法重新檢測
這兩份標本,結果最終顯示又為陰性,與化學發光法結果相符。
3
討論
ELISA
法檢測
HBsAg
是標本中存在的乙肝表面抗原與固相載休表面的抗體
相結合,
放入恒溫箱,
通過一段時間的反應,
再進行洗滌拍干后加入酶標記的抗
體,反應一定時間后,再進行洗滌拍干,最后加顯色劑,與固相載體表面復合物
相反應,
如果存在乙肝表面抗原抗體復合物就會出現一定的顏色反應,
呈現陽性。
化學發光法將待測標本與生物素標記的單克隆抗體、
三氯聯吡啶釕標記單克隆抗
體、
鏈酶親和素標記磁性微粒加入到反應杯中共同溫育,
形成磁性微珠包被抗體
-
抗原
-
發光劑標記抗體復合物。經儀器內的緩沖液沖洗,當磁性微粒流經電極表
面時,
被安裝在電極下的磁鐵吸引住,
而游離的發光劑標記抗體被沖走。
同時在
電極加電壓,啟動電化學發光反應,使發光試劑標記物三氯聯吡啶釕和
TPA
在
電極表面進行電子轉移,產生電化學發光,光的強度與待測抗原的濃度成正比。
全自動化學發光法所有的操作控制由儀器操作,
具有靈敏度,
準確率高,
無輻射
及快捷方便等優點
[4]
,避免了各種交叉污染,標本加錯的可能性,避免了溫度,
時間控制偏差等。在
ELISA
法測定中影響因素較多,操作中的各個環節對試驗
的檢測結果影響較大,
在臨床檢驗中除正常反應外,
有時??梢姷揭恍╁e誤的結
果(即假陽性或陰性結果)
[5]
。如在人工加標本,加酶結合物,加底物,可能
產生氣泡或濺出等人為的不當操作,
特別是洗滌在
ELISA
中決定著實驗的成敗,
標本中的非特異性的干擾物質吸附于固相載體上后,
如果沒洗脫掉,
就會產生假
陽性,錯誤的結果。
320
份標本中兩種方法檢測雖沒有顯著性差異,但有
2
份標本結果不相符,
通過
ELISA
法一旦報告給患者,就會引起多方面的麻煩?;瘜W發光法雖所需時
間短,干擾因素少,不易出現假陽性,但成本高。由于
ELISA
法成本比較低,
檢測的價格便宜,雖耗時長,實驗的影響因素比較多,易出現假陽性,但大多數
健康體檢人員還是比較喜歡采用此種方法。
所以作為臨床檢驗人員在操作的過程
中一定要仔細,
不得馬虎,
對于像這種
OD
值
<0.5
標本一定要重新檢測,
排除人
為因素。
綜上所述,在乙型肝炎病毒乙肝表面抗原的檢測上,
ELISA
法成本比較低,
耗時長,實驗的影響因素比較多,易出現假陽性?;瘜W發光法成本高,所需時間
短,干擾因素少,不易出現假陽性。
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編輯
/
哈濤